一、目的
通過在超凈工作臺上進行無菌操作訓練，初步掌握組織培養的無菌操作技術及外植體的消毒滅菌技術
二、原理
滅菌是組織培養中重要的工作環節之一，是指采用理化手段殺死物體表面及其孔隙內的一切微生物，包括細菌的芽孢和真菌的孢子。組織培養中要求無菌室、超凈工作臺達到無菌狀態，植物材料也要經過消毒滅菌后再接種，接種人員的雙手同樣如此。
無菌室和超凈工作臺可采用甲醛、高錳酸鉀混合薰蒸，結合紫外燈照射20～30分鐘；外植體可采用70%酒精和10%的次氯酸鈉殺菌；雙手可用70%的酒精棉球擦拭；接種工具可采用70%酒精棉球擦拭，再經火焰灼燒滅菌。
MS培養基中包含有植物生長所需的各種營養元素，可為離體培養的生物材料提供近似于生物體內及外界生長生存的營養環境。當植物材料滅菌后即可在適宜的培養基、適宜的溫度條件下生長。
三、試劑及器材
超凈工作臺、酒精燈、鑷子、無菌培養皿、無菌濾紙、無菌蒸餾水、無菌小燒杯、10%次氯酸鈉、70％乙醇、廢液缸、酒精棉球、打火機
四、操作
（1）準備工作：配制MS基本培養基，備用。
（2）用酒精棉球將超凈臺的操作表面擦拭干凈。
（3）將實驗器材及試劑放入超凈工作臺中，紫外滅菌25－30min。
（4）滅菌后打開超凈風，吹5min。
（5）洗凈雙手，進入無菌室。在超凈臺內點燃酒精燈，用酒精棉球反復擦拭雙手，尤其要注意關節部位；超凈臺的表面也要用酒精棉球單方向擦拭（一般由里到外）。
（6）取適量種子置于100/50ml燒杯中，用70%的乙醇消毒30s-1min，然后將酒精倒入廢液缸中，加入無菌水，輕輕晃動，清洗1-2min后，將無菌水倒入廢液缸中。
（7）將10%次氯酸鈉(NaClO)加入燒杯中，消毒10 min，期間不時晃動燒杯，使種子充分接觸消毒劑；然后將NaClO溶液倒入廢液缸中，加入無菌水，輕輕晃動，清洗3-4min后傾去，如此重復3-4次。
（8）將種子置于墊有濾紙的無菌培養皿中，吸干種子表面的水分。在整個操作過程中鑷子和解剖刀要多次火焰消毒，冷卻后再使用。
（9）接種：每瓶接種種子10粒。接種時，應在酒精燈旁操作，錐形瓶口應斜向火焰；接種好后，將錐形瓶的瓶口在酒精燈火焰上轉動地燒一遍，封蓋瓶口，然后用線繩將瓶口扎牢，以免微生物進入，造成污染，導致培養失敗。
（9）接種結束后，清理和關閉超凈工作臺。
（10）將培養瓶放置于25℃光照培養箱/培養室培養并觀察。
五、結果
1、觀察種子的生長情況。
2、統計污染率、污染種類。