我G《規(guī)范》(1998 年修訂)在“衛(wèi)生”一章中要求“工作服的選材、式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級(jí)別要求相適應(yīng)，并不得混用。無(wú)菌工作必須包蓋全部頭發(fā)、胡須及腳部，并能阻擋人體脫落物。”歐洲GMP 對(duì)無(wú)菌產(chǎn)品生產(chǎn)的著裝要求有嚴(yán)格的規(guī)定，參見(jiàn)表2—18。
表2—18 歐洲GMP 對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)的著裝要求
潔凈度級(jí)別著裝要求
A、B 級(jí)
①面罩應(yīng)能完全遮住頭發(fā)、胡須，面罩下沿應(yīng)藏到*口中去
②滅毒口罩、無(wú)塵手套、滅毒或消毒的鞋套
③褲腳塞人鞋套，袖口塞人手套中
④無(wú)菌衣不能脫落纖維和顆粒性物質(zhì)，并能阻擋人體散發(fā)的塵粒
C 級(jí)
①頭發(fā)、胡須應(yīng)全部遮住
②單層或雙層褲裝，腰部扎緊
③合適的鞋子或鞋套
④工作服不能脫落纖維和顆粒性物質(zhì)
D 級(jí)
①頭發(fā)、胡須應(yīng)全部遮住
②一般的防護(hù)工作服
③合適的鞋子或鞋套
④有適當(dāng)措施防止來(lái)自潔凈室外的污染
注：1．外界衣物不能帶到A、B 級(jí)的更衣室(應(yīng)換上工作服后進(jìn)入)。
2．上述潔凈室不得帶人手表、化妝品和shou飾。因此所有需進(jìn)入無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室和無(wú)菌制造區(qū)(包括100 級(jí)及10 000 級(jí)區(qū)域)工作的操作工、機(jī)修工、QC／QA 取樣人員必須接受更衣程序的確認(rèn)，并公布合格者的名單，同時(shí)規(guī)定時(shí)效，超過(guò)時(shí)效必須進(jìn)行再次確認(rèn)，以確保進(jìn)入無(wú)菌室的所有人員是“會(huì)穿無(wú)菌衣”的。有條件的話，QA 部門應(yīng)攝下每個(gè)人的更衣程序并加以保存，作為染菌的研究資料，定期進(jìn)行檢查。
一、建立更衣的標(biāo)準(zhǔn)操作程序
人員進(jìn)入無(wú)菌區(qū)先得通過(guò)氣閘室，但人既不能滅菌、除菌，也不能消毒，以致成為污染無(wú)菌環(huán)境的主要威脅。無(wú)菌的衣服、鞋套、手套、帽子、口罩以及眼鏡對(duì)所有要進(jìn)入無(wú)菌區(qū)的人來(lái)說(shuō)是**必需的。由于無(wú)菌服飾可能是控制微生物污染的**好辦法，所以必須教會(huì)人們穿戴服飾的正確辦法。更衣的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)必須完備并在任何時(shí)候都應(yīng)堅(jiān)持。更衣程序可因各單位的具體情況而定。例如，用長(zhǎng)凳將更衣室一分為二的穿衣程序一般為：
①把需穿著的無(wú)菌服置于長(zhǎng)凳上。
②一只腳先套上鞋套，把腿橫過(guò)長(zhǎng)凳，在此之前必須確保鞋套未觸及**間(潔凈級(jí)別較低的)地面。另一只腳重復(fù)此動(dòng)作。
③先戴頭罩然后穿衣，必須注意不能將衣服的任何部分觸及地面。拉緊拉鏈，齊整衣服，
褲腳應(yīng)覆蓋鞋套，袖套須覆蓋整個(gè)手臂直**手腕，頭罩要小心地塞進(jìn)頸部。
④用口罩遮蔽鼻、口，并縛緊。
⑤在全身鏡前檢查著裝，檢查在無(wú)菌衣上是否有開口處，按要求作**后整理。
⑥**后戴上無(wú)菌手套，手套上部緊縛住袖口。
二、人員的發(fā)菌量
分析G外實(shí)驗(yàn)資料，可以認(rèn)為人員的發(fā)菌量有以下數(shù)據(jù)可供參考。
①潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無(wú)菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量一般為10～300 個(gè)／(min ·人)，軀體一般活動(dòng)時(shí)的發(fā)菌量為150～1000 個(gè)／(min ·人)，快步行走時(shí)的發(fā)菌量為900—2500 個(gè)／(min ·人)。
②咳嗽一次的發(fā)菌量一般為70～700 個(gè)／(min ·人)，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為4000～60 000 個(gè)／(min ·人)。
③穿平常衣服時(shí)發(fā)菌量為3300～62000 個(gè)／(min ·人)。
④無(wú)口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為(1：7)～(1：14)。
⑤發(fā)菌量：發(fā)塵量為(1 ： 500)～(1：1000)。
可知潔凈室內(nèi)穿無(wú)菌衣人員的靜態(tài)發(fā)菌量一般不超過(guò)300 個(gè)／(min ·人)，動(dòng)態(tài)發(fā)菌量一般不超過(guò)1000 個(gè)／(min ·人)。
三、更衣的確認(rèn)程序
1．確認(rèn)的程序
①每個(gè)受訓(xùn)者事先必須先經(jīng)過(guò)無(wú)菌操作的培訓(xùn)，如無(wú)菌衣穿著的SOP，接觸法取樣的方法，污染控制和無(wú)菌操作技術(shù)等。
②進(jìn)入無(wú)菌室前，受訓(xùn)者先要進(jìn)行更衣的實(shí)踐。
③管理人員必須向每個(gè)受訓(xùn)者解釋更衣微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)的程序。
④將微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)用在3 次更衣程序上。受訓(xùn)者經(jīng)過(guò)3 次更衣練習(xí)，直到達(dá)到“會(huì)穿衣進(jìn)入無(wú)菌室”的程度。
⑤每次挑戰(zhàn)性試驗(yàn)用Rodac 直接接觸法取樣，取樣點(diǎn)如下：
——每個(gè)手套(5 只手指)；
——胸口處(在拉鏈中心**少有1 點(diǎn))；
——口罩；
——帽兜額頭處；
——防護(hù)眼鏡(2 塊鏡片)；
——靴子與工作褲接口處(左右各1 點(diǎn))；
——前臂。
2．頻率
①每個(gè)受訓(xùn)者必須經(jīng)過(guò)3 次更衣試驗(yàn)達(dá)標(biāo)后才能進(jìn)入無(wú)菌室。
②更衣已合格的操作工每年需重復(fù)一次更衣試驗(yàn)，尚未進(jìn)入無(wú)菌室的人員每4 個(gè)月重復(fù)一次。
③當(dāng)發(fā)現(xiàn)合格人員中有違反更衣程序趨向時(shí)，須重復(fù)l～3 次更衣試驗(yàn)。
3．更衣合格標(biāo)準(zhǔn)
①已證明受訓(xùn)人掌握了更衣程序、污染控制和無(wú)菌技術(shù)。
②資料和錄像顯示出受訓(xùn)人3 次更衣試驗(yàn)的程序都是正確的。
③3 次試驗(yàn)的微生物檢測(cè)結(jié)果在合格標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。參考合格標(biāo)準(zhǔn)如下表所示。采樣點(diǎn)參考標(biāo)準(zhǔn)(Rodac 法)／CFU·皿”采樣點(diǎn)參考標(biāo)準(zhǔn)(Rodac 法)／CFU·皿”
采樣點(diǎn)        CFU·皿        采樣點(diǎn)        CFU·皿
手套        ≤3        前額        ≤5
胸口        ≤5        眼鏡        ≤10
前臂        ≤5        靴子—褲子接合處        ≤5#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
口罩        ≤10
 
 
 
 
 
 
 
 
關(guān)于無(wú)菌工藝驗(yàn)證

典型的無(wú)菌原料藥精制生產(chǎn)工藝為：將原材料配制成溶液－除菌過(guò)濾－結(jié)晶－過(guò)濾－洗滌－干燥－粉碎－分裝。
在上述的滅菌生產(chǎn)工藝中，除了除菌過(guò)濾外，還包括設(shè)備滅菌、包裝材料滅菌、無(wú)菌衣物滅菌等等。這些滅菌過(guò)程經(jīng)過(guò)驗(yàn)證能保證從非無(wú)菌狀態(tài)轉(zhuǎn)化成無(wú)菌狀態(tài)。但是無(wú)菌原料藥的生產(chǎn)過(guò)程是精制過(guò)程和上述這些滅菌過(guò)程的組合，或者稱之為無(wú)菌工藝，這種無(wú)菌工藝只有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證才能確保產(chǎn)品的無(wú)菌性能可靠。驗(yàn)證過(guò)程一般是選擇合適的介質(zhì)模擬生產(chǎn)流程，使介質(zhì)流經(jīng)整個(gè)生產(chǎn)系統(tǒng)，然后對(duì)模擬介質(zhì)培養(yǎng)，觀察是否有細(xì)菌長(zhǎng)出。如果系統(tǒng)中有染菌的因素存在，在對(duì)模擬介質(zhì)的培養(yǎng)中就會(huì)被發(fā)現(xiàn)。

1 驗(yàn)證前的準(zhǔn)備

無(wú)菌工藝驗(yàn)證是生產(chǎn)、質(zhì)量、工程和其它部門之間廣泛合作的一項(xiàng)工作。在驗(yàn)證之前需要做一些準(zhǔn)備工作。

1.1 生產(chǎn)設(shè)施的設(shè)計(jì)和確認(rèn)
生產(chǎn)設(shè)施的設(shè)計(jì)應(yīng)能使?jié)撛诘奈廴窘档偷?*小。生產(chǎn)設(shè)施應(yīng)易于清潔和消毒；產(chǎn)品或物料敞開之處的空氣要有一定的品質(zhì)要求；溫度和濕度的控制要適宜，使穿著無(wú)菌衣的操作人員感到舒適，應(yīng)能防止污染和交叉污染等等。其中單一因素對(duì)無(wú)菌操作的具體影響也許并不是很明顯，但如果設(shè)施設(shè)計(jì)不夠全面，這種影響將非常顯著。應(yīng)重視設(shè)計(jì)上的細(xì)節(jié)，減少污染源，以確保無(wú)菌生產(chǎn)得以實(shí)施。無(wú)菌工藝驗(yàn)證是執(zhí)行難度較大的驗(yàn)證之一，參與者應(yīng)充分意識(shí)到設(shè)施的設(shè)計(jì)和確認(rèn)是驗(yàn)證成功的主要因素。

1.2 公用工程的確認(rèn)
影響產(chǎn)品質(zhì)量的公用工程如蒸汽、壓縮空氣、加熱、制冷、水系統(tǒng)等都應(yīng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)。公用工程是生產(chǎn)得以正常實(shí)施的保證之一。若其中任何一個(gè)系統(tǒng)出現(xiàn)故障，將會(huì)使產(chǎn)品發(fā)生潛在的或嚴(yán)重的污染。應(yīng)有公用工程的維護(hù)計(jì)劃并按計(jì)劃執(zhí)行，目的就是不讓系統(tǒng)發(fā)生故障，保證生產(chǎn)的順利進(jìn)行，而不是發(fā)生故障后去修理。經(jīng)常發(fā)生故障而被維修的公用工程是不能保證無(wú)菌生產(chǎn)的。

1.3 設(shè)備和工藝確認(rèn)
在本驗(yàn)證實(shí)施之前，所有的設(shè)備、無(wú)菌環(huán)境、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)以及生產(chǎn)工藝都應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。產(chǎn)品暴露是發(fā)生污染使無(wú)菌工藝驗(yàn)證失敗的主要原因之一，為防止或降低污染發(fā)生的幾率，給暴露產(chǎn)品提供層流空氣的百級(jí)層流罩是非常重要的；被滅菌過(guò)的物品由滅菌器到生產(chǎn)線的傳遞和經(jīng)由必要的手工操作進(jìn)入生產(chǎn)線前的保護(hù)也是**關(guān)重要的，應(yīng)盡量避免人員對(duì)設(shè)備或物料的接觸的操作。這些都應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

1.4 設(shè)備的清洗和滅菌
在無(wú)菌工藝驗(yàn)證之前接觸模擬介質(zhì)的設(shè)備表面應(yīng)清洗滅菌，并防止滅菌后的再污染。若生產(chǎn)的藥品具有抗菌性或者殺菌性，這種清洗尤為重要。若清洗或滅菌不徹底，殘存的藥品會(huì)使模擬介質(zhì)受到污染或設(shè)備表面的微生物使模擬介質(zhì)染菌而使驗(yàn)證失敗。這種清洗和滅菌過(guò)程應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，能保證清洗徹底和滅菌成功。

1.5 模擬介質(zhì)的選擇
選擇的模擬介質(zhì)應(yīng)有如下特征：沒(méi)有抑菌作用。這是顯而易見(jiàn)的，若模擬介質(zhì)有抑菌作用，將會(huì)對(duì)生產(chǎn)系統(tǒng)中的細(xì)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，以**于不能培養(yǎng)出細(xì)菌，產(chǎn)生假的結(jié)果。模擬介質(zhì)**好具有促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)的作用。如果選擇對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)有促進(jìn)作用的固體培養(yǎng)介質(zhì)做驗(yàn)證，對(duì)生產(chǎn)環(huán)境的保護(hù)則特別重要。因?yàn)槿绻行┎僮魇鞘菇橘|(zhì)暴露的，介質(zhì)的塵粒會(huì)飄散在某些較難清洗的地方，如空調(diào)系統(tǒng)的送風(fēng)口和回風(fēng)口附近，給細(xì)菌在該處的滋生創(chuàng)造了條件，所以應(yīng)有措施保護(hù)不易清洗的死角不被介質(zhì)污染。模擬介質(zhì)還應(yīng)在培養(yǎng)基內(nèi)有較好的溶解度。因?yàn)槿羧芙庑阅懿缓茫瑧腋≡谂囵B(yǎng)基中的模擬介質(zhì)使培養(yǎng)基發(fā)生混濁,影響結(jié)果的判斷。模擬介質(zhì)加入培養(yǎng)基后，不應(yīng)影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，pH不發(fā)生大的變化，以適應(yīng)大多數(shù)細(xì)菌的生長(zhǎng)。對(duì)設(shè)備沒(méi)有腐蝕性，對(duì)人體無(wú)害，對(duì)環(huán)境不發(fā)生污染。基于以上分析,通常可供選用的模擬介質(zhì)有PEG4000、PEG6000、乳糖和甘露醇等。

1.6 培養(yǎng)基
一般來(lái)說(shuō)，應(yīng)針對(duì)不同的微生物選擇不同的培養(yǎng)基，比如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基適用于需氧菌和厭氧菌，大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基適用于需氧菌和真菌。在無(wú)菌工藝驗(yàn)證中事先不知道系統(tǒng)中存在什么樣的微生物，但分別選擇多種培養(yǎng)基分別做無(wú)菌測(cè)試也較難做到。應(yīng)根據(jù)實(shí)際的生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)環(huán)境選擇適用于大多數(shù)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。比較之下，推薦用大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基，因?yàn)榇蠖鄶?shù)無(wú)菌原料藥的生產(chǎn)都和空氣接觸，污染厭氧菌的幾率很小，而且被污染的微生物大多數(shù)為需氧菌或真菌。

1.7 模擬介質(zhì)的滅菌
驗(yàn)證的結(jié)果受模擬介質(zhì)無(wú)菌性的影響很大，若不能保證它的無(wú)菌性，或在驗(yàn)證之前受到了污染，則不能保證驗(yàn)證結(jié)果的可信性。模擬介質(zhì)在使用之前應(yīng)滅菌。滅菌的方法很多，如γ射線滅菌，濕熱滅菌等等。不管是哪種滅菌方法，在確定滅菌參數(shù)后都應(yīng)對(duì)這種滅菌方法進(jìn)行驗(yàn)證。比如驗(yàn)證γ射線滅菌，應(yīng)先測(cè)生物負(fù)荷量，根據(jù)生物負(fù)荷量得到所需要的吸收劑量。吸收劑量應(yīng)經(jīng)確認(rèn)，可以用微生物吸收劑量計(jì)或者化學(xué)吸收劑量計(jì)確認(rèn)吸收劑量。

1.8 培養(yǎng)基的滅菌
shou先選擇一種培養(yǎng)基滅菌的方法。一般地，培養(yǎng)基滅菌方法有γ射線滅菌法和濕熱滅菌法，選用的滅菌方法應(yīng)做驗(yàn)證。培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)做生長(zhǎng)促進(jìn)試驗(yàn)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基并滅菌，將滅菌后的培養(yǎng)基分裝于預(yù)定數(shù)量的試管中(此數(shù)量應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)，在一半數(shù)量的試管中接枯草芽孢桿菌，接種量<100CFU；在另一半數(shù)量的試管中接種白色念珠菌，接種量<100CFU，接種后蓋塞，封口并在32.5±2.5℃和22.5±2.5℃分別培養(yǎng)7天，7天內(nèi)**少50%以上接種的各試管培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種微生物生長(zhǎng)。#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#


2 驗(yàn)證的實(shí)施

2.1 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的確認(rèn)以及人員培訓(xùn)
標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)是指導(dǎo)操作人員進(jìn)行某項(xiàng)操作的書面程序，是操作人員的操作標(biāo)準(zhǔn)，是生產(chǎn)操作成功的關(guān)鍵。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)能對(duì)操作人員提供足夠的指導(dǎo)以完成本項(xiàng)操作。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)由技術(shù)人員編寫，部門主管審閱，質(zhì)量保證部主管批準(zhǔn)。將批準(zhǔn)后的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程對(duì)操作人員進(jìn)行培訓(xùn)，使之真正理解并能熟練掌握。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的原件及培訓(xùn)記錄存放在資料管理部門，操作現(xiàn)場(chǎng)存放的是復(fù)印件。驗(yàn)證前應(yīng)確認(rèn)每一項(xiàng)操作有標(biāo)準(zhǔn)可依，以免造成管理上的漏洞，且確認(rèn)這項(xiàng)操作已被培訓(xùn)過(guò)，且操作人員已能熟練掌握。驗(yàn)證之前應(yīng)對(duì)所有的操作人員和質(zhì)量管理人員培訓(xùn)與驗(yàn)證有關(guān)的各項(xiàng)操作(可根據(jù)驗(yàn)證方案和SOP)，以避免驗(yàn)證過(guò)程中有關(guān)人員不理解甚**不知道怎么做，保證驗(yàn)證的順利實(shí)施。如果新增加或調(diào)換了崗位操作人員，應(yīng)重新做無(wú)菌工藝驗(yàn)證，以保證無(wú)菌操作能順利進(jìn)行。人是生產(chǎn)中**重要的因素，也是容易被忽略的因素，這一點(diǎn)應(yīng)特別值得注意。

2.2 儀表校正
生產(chǎn)中的各項(xiàng)參數(shù)都是根據(jù)儀表來(lái)讀取的，由一個(gè)沒(méi)有校正過(guò)的儀表得到的參數(shù)或結(jié)果是不可靠的。由沒(méi)有校正過(guò)的儀表得到錯(cuò)誤的結(jié)果而導(dǎo)致生產(chǎn)中的異常，這樣的情況并不少見(jiàn)。儀表校正應(yīng)由有資格的人員或單位來(lái)進(jìn)行，并符合G家可追蹤的標(biāo)準(zhǔn)。儀表的校正頻率**少符合G家規(guī)定，并要根據(jù)使用頻率調(diào)整并嚴(yán)于此標(biāo)準(zhǔn)。使用頻率越高，儀表的磨損越厲害，校正頻率就應(yīng)越高。由沒(méi)有經(jīng)過(guò)校正的儀表得到的數(shù)據(jù)無(wú)效。

2.3 工藝條件
無(wú)菌原料藥的生產(chǎn)工藝具有其自己的特點(diǎn)：設(shè)備種類多，設(shè)備復(fù)雜，管路長(zhǎng)，且不同的生產(chǎn)工藝有不同的特點(diǎn)，根據(jù)各自的特點(diǎn)選擇固體或液體模擬介質(zhì)。雖然盡量減少設(shè)備的內(nèi)部暴露和減少物料產(chǎn)品的暴露，但是不可避免的會(huì)有一些設(shè)備與外界環(huán)境相通，或是物料暴露在環(huán)境中，這些開口處應(yīng)有呼吸器或百級(jí)層流空氣的保護(hù)。驗(yàn)證時(shí)應(yīng)有模擬這些物料暴露的操作。有些生產(chǎn)工藝中具有結(jié)晶的操作，這使得模擬過(guò)程有些困難，因?yàn)榻Y(jié)晶過(guò)程中有相變產(chǎn)生，這種變化是否會(huì)影響到微生物的生長(zhǎng)是一個(gè)值得考慮的問(wèn)題。**好的辦法是選擇兩種模擬介質(zhì)，它們?cè)诮Y(jié)晶過(guò)程發(fā)生反應(yīng)生成另一種模擬介質(zhì)。選擇這樣的介質(zhì)可能會(huì)有很大困難。簡(jiǎn)單起見(jiàn)，也可用同一種液體模擬介質(zhì)模擬結(jié)晶過(guò)程流經(jīng)所有管路加到結(jié)晶罐中。若結(jié)晶過(guò)程有加晶種的操作，模擬過(guò)程中也應(yīng)有這樣的操作。晶種可用模擬介質(zhì)代替。為使晶體粒度均勻，有些結(jié)晶過(guò)程有降溫過(guò)程，在模擬過(guò)程中不應(yīng)降溫，因?yàn)槲⑸镌诘蜏叵虏灰咨L(zhǎng)。干燥過(guò)程中的溫度一般會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)，甚**將微生物殺死，在模擬過(guò)程中應(yīng)保持室溫，以免溫度太高殺死細(xì)菌而使驗(yàn)證失敗。也有用冷凍干燥除去濕分的，在這種情況下,模擬凍干參數(shù)的選擇也不應(yīng)使細(xì)菌的生長(zhǎng)受到抑制。總之，在驗(yàn)證過(guò)程中盡量使工藝參數(shù)和實(shí)際情況一致，但是為了使細(xì)菌生長(zhǎng)，允許選擇的工藝參數(shù)和實(shí)際情況不一致，但是這些參數(shù)不應(yīng)和生產(chǎn)工藝產(chǎn)生重大差別。無(wú)菌原料藥的分裝劑量一般較大，在這種情況下在分裝過(guò)程中應(yīng)減慢分裝速度，以增加產(chǎn)品暴露的機(jī)會(huì)，在**差狀況進(jìn)行操作。

2.4 操作時(shí)限
在原料藥的生產(chǎn)中每一操作都應(yīng)有操作時(shí)限來(lái)保證已滅菌的物品避免受到微生物的污染或產(chǎn)品降解。操作時(shí)限越長(zhǎng)，產(chǎn)品受污染的幾率越大。在無(wú)菌工藝驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)將操作時(shí)限調(diào)整****大，在**差狀況下操作，如果這時(shí)驗(yàn)證結(jié)果是可靠的，那么在小于此時(shí)間下進(jìn)行的操作當(dāng)然也是可靠的。尤其是已滅菌物品由滅菌到使用時(shí)的保存時(shí)間更加重要。在驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)將已滅菌物品**少放置到規(guī)定的保存時(shí)間，這樣的驗(yàn)證結(jié)果更具有說(shuō)服力。每一步操作都應(yīng)延長(zhǎng)**甚**超過(guò)操作時(shí)限，這樣會(huì)使得總的工藝時(shí)間很長(zhǎng)，但是這樣的驗(yàn)證結(jié)果更能保證正常生產(chǎn)時(shí)的無(wú)菌狀態(tài)。

2.5 環(huán)境監(jiān)測(cè)
在驗(yàn)證過(guò)程中環(huán)境的質(zhì)量是**關(guān)重要的，應(yīng)在惡劣的環(huán)境下進(jìn)行操作，但是不能惡劣到使產(chǎn)品發(fā)生染菌的程度。一般地，采用增加操作人員的數(shù)量的辦法惡化環(huán)境。應(yīng)對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)以評(píng)價(jià)驗(yàn)證過(guò)程，所有暴露產(chǎn)品的操作都有監(jiān)測(cè)本區(qū)域的環(huán)境。環(huán)境監(jiān)測(cè)包括以下幾個(gè)項(xiàng)目：菌室的溫度、濕度、換氣次數(shù)、塵埃粒子、沉降菌、浮游菌、人員和表面微生物。沉降菌和浮游菌用培養(yǎng)皿進(jìn)行測(cè)試，培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂。這種方法簡(jiǎn)單且價(jià)格便宜。培養(yǎng)皿應(yīng)放置在微生物監(jiān)測(cè)史上情況**差的部位。在驗(yàn)證過(guò)程中應(yīng)增加取樣的頻率，并且應(yīng)在分裝區(qū)域放2個(gè)以上的取樣培養(yǎng)皿連續(xù)暴露取樣，暴露時(shí)間應(yīng)為分裝的全過(guò)程，但不宜超過(guò)4個(gè)小時(shí)，否則營(yíng)養(yǎng)瓊脂變干而不能提供足夠的營(yíng)養(yǎng)使細(xì)菌不能長(zhǎng)出。營(yíng)養(yǎng)瓊脂在使用前應(yīng)做微生物生長(zhǎng)促進(jìn)試驗(yàn)，方法同培養(yǎng)基的生長(zhǎng)促進(jìn)試驗(yàn)，以保證營(yíng)養(yǎng)瓊脂對(duì)微生物生長(zhǎng)的適應(yīng)性。在環(huán)境監(jiān)測(cè)中使用了不適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，微生物沒(méi)有長(zhǎng)出來(lái)，產(chǎn)生了假的好的結(jié)果這種情況也時(shí)有發(fā)生，這使得生長(zhǎng)促進(jìn)試驗(yàn)尤為重要。測(cè)試浮游菌可以用縫隙-瓊脂撞擊采樣法、離心采樣法、液體撞擊采樣法及膜過(guò)濾法。一般說(shuō)來(lái)，浮游菌比沉降菌更能反映環(huán)境的質(zhì)量。表面微生物的測(cè)試可用擦拭法或Rodac碟。用擦拭法測(cè)表面微生物之前應(yīng)先測(cè)回收率。影響回收率的因素很多，包括微生物的種類和數(shù)量，不同的操作人員進(jìn)行測(cè)試會(huì)得到不同的回收率，主要原因是擦拭時(shí)用力的大小，這里建議每個(gè)操作人員有自己的回收率數(shù)值。測(cè)試回收率時(shí)不要選擇生命脆弱的微生物，因?yàn)檫@些微生物被擦拭時(shí)會(huì)死去，產(chǎn)生不可信的結(jié)果。用Rodac碟測(cè)試表面微生物比較方便，但是這種測(cè)試會(huì)有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)殘留在被測(cè)試的表面，應(yīng)清洗干凈，否則這是一個(gè)很大的污染。塵埃粒子測(cè)試可以采用不同類型的粒子計(jì)數(shù)器，目前G際上采用Royco，Climat，Coulter等。塵埃粒子監(jiān)測(cè)的結(jié)果應(yīng)能證明產(chǎn)品暴露的關(guān)鍵區(qū)域空氣質(zhì)量達(dá)到了100級(jí)潔凈區(qū)的空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。我G有指導(dǎo)環(huán)境監(jiān)測(cè)的G家標(biāo)準(zhǔn)，G際上流行的標(biāo)準(zhǔn)是FS209E，它對(duì)環(huán)境監(jiān)測(cè)及結(jié)果評(píng)價(jià)給出了很詳細(xì)的指導(dǎo)。#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#

2.6 工藝過(guò)程的模擬
由于一般原料藥生產(chǎn)工藝都經(jīng)過(guò)結(jié)晶過(guò)程，其間會(huì)發(fā)生相變，因此，無(wú)菌工藝驗(yàn)證不可能完全按照原來(lái)的實(shí)際工藝來(lái)進(jìn)行模擬。可采用分步驟完成的方法：(1)從原材料配制起，以水代料，不加原料，完全用純化水。經(jīng)過(guò)除菌過(guò)濾、結(jié)晶、過(guò)濾、洗滌幾個(gè)步驟后，從過(guò)濾器底部將水放掉。(2)放掉水后，將過(guò)濾器蒸汽滅菌，然后加入滅菌的模擬介質(zhì)。以下的干燥、粉碎、分裝步驟再按生產(chǎn)工藝進(jìn)行。生產(chǎn)過(guò)程中可能有升溫、降溫過(guò)程，此時(shí)應(yīng)注意模擬介質(zhì)對(duì)溫度的敏感性。可通過(guò)實(shí)驗(yàn)室考察。

2.7 工藝各步驟中的取樣
根據(jù)各自的生產(chǎn)工藝在每個(gè)工藝步驟中比如結(jié)晶、過(guò)濾、干燥等都應(yīng)取樣測(cè)試無(wú)菌，以評(píng)價(jià)該步驟的無(wú)菌性能，為發(fā)現(xiàn)解決無(wú)菌問(wèn)題提供足夠的數(shù)據(jù)指導(dǎo)。取樣頻率和數(shù)量應(yīng)有代表性，否則測(cè)試結(jié)果失去統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。樣品在從取出到測(cè)試的時(shí)間里不應(yīng)被污染，尤其是液體樣品污染的途徑很多可能性很大，諸多因素中時(shí)間是一個(gè)重要因素，樣品取出后**好立即測(cè)試，以免防止時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而被微生物污染。

2.8 樣品培養(yǎng)
陰性對(duì)照:在驗(yàn)證過(guò)程中，隨機(jī)取出有代表性的一定數(shù)量的裝有培養(yǎng)基的包裝容器作為陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照:驗(yàn)證過(guò)程中，隨機(jī)取出有代表性的一定數(shù)量的裝有模擬介質(zhì)的包裝容器，一半接種濃度為<100個(gè)微生物/0.1ml的枯草芽孢桿菌，另一半接種濃度為<100個(gè)微生物/0.1ml的白色念珠菌。接種后分別在適宜的溫度下培養(yǎng)7天，7天內(nèi)**少50%的接種包裝容器中有明顯的所接種微生物的生長(zhǎng)，以此作為陽(yáng)性對(duì)照。樣品培養(yǎng)：將分裝得到的產(chǎn)品在操作現(xiàn)場(chǎng)灌裝培養(yǎng)基，然后密封，檢查密封性。全部產(chǎn)品應(yīng)在適宜的溫度下培養(yǎng)14天，14天時(shí)檢查培養(yǎng)的全部樣品的微生物生長(zhǎng)情況。若發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)注明批號(hào)，包裝容器號(hào)，同時(shí)檢查密封情況。若有破損注明原因。污染的樣品應(yīng)做微生物鑒別，**少鑒別到種。

2.9 結(jié)果評(píng)價(jià)
在制劑中以污染水平不過(guò)0.1%為接受標(biāo)準(zhǔn)，但是在無(wú)菌原料藥生產(chǎn)中，包裝單位較大，得到的總分裝容器數(shù)一般較小，這使得抽樣測(cè)試和結(jié)果計(jì)算失去統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。又因?yàn)樯a(chǎn)批量是固定的，因此所有產(chǎn)品都應(yīng)被培養(yǎng)。若發(fā)現(xiàn)有一個(gè)容器長(zhǎng)菌，就認(rèn)為無(wú)菌生產(chǎn)工藝中有染菌的因素存在，應(yīng)立即停產(chǎn)，調(diào)查產(chǎn)生污染的原因，采取措施后重復(fù)做驗(yàn)證。這樣的做法在無(wú)菌原料藥的無(wú)菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證中是可以接受的。本驗(yàn)證**少連續(xù)三批全部合格才可以認(rèn)為此無(wú)菌生產(chǎn)工藝符合無(wú)菌要求。

3 **終報(bào)告
驗(yàn)證完成之后應(yīng)起草一份**終報(bào)告，對(duì)以上內(nèi)容做一個(gè)簡(jiǎn)要總結(jié)，包括以下內(nèi)容：驗(yàn)證題目、參加驗(yàn)證部門和人員、采用的工藝參數(shù)和操作時(shí)限、選擇的模擬介質(zhì)和培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件和**終結(jié)果、**終報(bào)告應(yīng)由企業(yè)質(zhì)量保證部主管批準(zhǔn)。只有當(dāng)**終結(jié)果合格并且**終報(bào)告經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)后，企業(yè)的無(wú)菌原料藥生產(chǎn)才能開始(或繼續(xù))進(jìn)行。

4 再驗(yàn)證
再驗(yàn)證的目的就是保證無(wú)菌生產(chǎn)工藝沒(méi)有隨生產(chǎn)的運(yùn)行產(chǎn)生污染的因素。應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)對(duì)再驗(yàn)證的頻率做規(guī)定。一般說(shuō)來(lái)，新生產(chǎn)線在投產(chǎn)之前要做無(wú)菌工藝驗(yàn)證，驗(yàn)證通過(guò)后該生產(chǎn)線才能投入使用。正在運(yùn)行的生產(chǎn)線應(yīng)每年**少做2次無(wú)菌工藝驗(yàn)證，每個(gè)操作人員每年**少參加一次無(wú)菌工藝驗(yàn)證。直接接觸藥品的生產(chǎn)崗位操作人員若有變動(dòng)，應(yīng)對(duì)產(chǎn)品的無(wú)菌工藝做再驗(yàn)證。