•2003年的非典疫情及2004年四月G家ＣＤＣ的ＳＡＲＳ實驗室感染事件之后，
生物安全柜的重要性及生物安全實驗室建設的迫切性已勿須多言。但由于歷史原因及經濟條件的不足，我G在生物安全*域內的相關標準規范相對薄弱。
•2004年G家制定了《實驗室生物安全通用要求》GB19489-2004，對在
二級生物安全柜在現場安裝、移動、檢修后等情況下規定的必測項目也僅規定了垂直氣流速度斷面測定、工作窗口進風風速測定、煙霧試驗、高效空氣過濾器檢漏試驗等幾項指標,而對微生物污染模擬試驗（挑戰性試驗）(KI-Discus 測試)未作要求,G內相關的試驗報道也不多。為此,我們進行了一次現場微生物試驗,目的在于探討
二級生物安全柜在現場使用時各項生物指標的安全性.
•參照歐盟標準EN12469-2000 《生物技術-
生物安全柜技術要求》和美G標準NSF49-2002《ClassⅡ（層流）
生物安全柜》
•包括三方面的試驗：
•1、人員保護試驗
•2、產品保護試驗
•3、交叉污染保護試驗
•
•06年實施的YY0569-2005《生物安全柜》相關內容基本參照了上述兩個標準
•1材料和方法
•1.1材料:生物安全柜:蘇州安泰空氣技術有限公司生產的BHC-ⅡB2型生物安全柜;試驗菌株: 枯草桿菌芽孢ATCC9372
•1.2方法
•1.2.1：交叉污染測試：確定安全柜在防止產品在同一工作室內互相細菌傳播污染的保護功效。見圖1
•試驗用圓筒的設置：在安全柜操作臺面的中央放置一直徑100mm的不銹鋼圓筒,模擬實驗時操作人員的手臂，一端緊靠安全柜的后壁，一端伸出安全柜工作窗150mm。
•噴霧器的設置：將含有55ml枯草桿菌芽孢菌混懸液（5×104/ml）的噴霧器置于安全柜左側面中央離操作臺面向上100mm處，噴霧器背面緊靠內壁。培養皿的設置：在噴霧器噴嘴的下方臺面往右側方向排列兩個對照皿，緊靠對照皿右側排三列φ90mm試驗皿。每列5個。見圖
•采樣程序：安全柜運行30min后開始試驗。取下培養皿蓋子，啟動噴霧器噴菌5min，噴菌量≥1ml/分鐘。噴霧器停止5min后，將培養皿蓋上。
•細菌培養：培養皿及對照皿在37℃環境中培養48h計算菌落數。
•在安全柜操作臺右側同樣方法重復一遍。
•1.2.2、產品保護測試：確定如果細菌釋放于工作室外，安全柜內部是否會受污染。見圖2
•試驗用圓筒的設置：同1.1.1。
•噴霧器的設置：將含有55ml枯草桿菌芽孢菌混懸液（5×106/ml）的噴霧器置于安全柜操作窗外側的水平中心，水平噴射軸在工作臺面向上350mm處，平行于工作面，噴嘴距工作窗外側100mm，并朝向工作窗。
•培養皿的設置：將40個φ90mm培養皿放置在安全柜臺面實驗用圓筒中軸線兩側（每側4列共20個平皿），另將1個對照皿放置于工作區前回風凹槽的上方。
•采樣程序：安全柜運行30min后開始試驗。取下培養皿蓋子，噴菌5min，噴菌量≥1ml/分鐘。噴霧器停止5min后，將培養皿蓋上。
•細菌培養：培養皿及對照皿在37℃環境中培養48h計算平均菌落數。
•1.2.3、人員保護試驗：確定如果在工作室內有細菌被釋放時，安全柜對此的密封保護性。
•試驗圓筒的設置：同1.2.1，圓筒中心軸下方、位于前窗操作口進分隔刪的上方放置一個陽性對照皿。
•噴霧器的設置：將含有55ml枯草桿菌芽孢菌混懸液（5×108/ml）的噴霧器置于操作柜內左右內壁的中央，水平噴射軸在工作臺面上方350mm處，平行于工作面。噴霧器的噴嘴距工作窗內側100mm處朝向工作臺。噴菌量≥1ml/分鐘。
•撞擊采樣器的設置：操作窗外測人員所在區域設6個撞擊式采樣器，空氣采樣量為12.5升/分鐘。內盛20ml無菌蒸餾水，采樣口設置在安全柜工作窗外側63mm處。其中兩個采樣口的軸心線相隔150mm,分別位于試驗圓筒的兩側并于試驗圓筒等高；兩個采樣器的軸心線相隔50mm，分列試驗圓筒的兩側于圓筒下沿30mm的 水平面上，另兩個采樣器軸心線相距300mm，水平面位于工作臺面向上360mm。兩個狹縫采樣器的設置：采樣口與安全柜工作臺面齊平，垂直軸線距安全柜操作窗向外150mm，分別距左右兩側的內壁200mm。內置φ150mm的培養皿各一個，空氣采樣量為28.3升/分鐘。見圖三
•采樣程序：生物安全柜運行30min后開始試驗。采樣程序見表1：
•表1：采樣程序
•時間（min） 試驗步驟
0 開啟狹縫采樣器
5 開啟噴霧器
6 開啟撞擊采樣器
11 停止撞擊采樣器
11.5 停止噴霧器
30 停止狹縫采樣器
•細菌培養：采樣后所有撞擊采樣器的采樣液在無菌條件下用一直徑47mm孔徑為0.22μm的濾膜過濾后，取出濾膜置于有營養瓊脂的φ90mm的培養皿。把置有過濾膜的培養皿、兩個狹縫采樣器的培養皿及對照培養皿在37℃環境中培養48h讀菌落數。
•每次試驗之間對操作臺內外用1％過氧乙酸溶液擦拭15分鐘，安全柜運行30分鐘以上。試驗重復三次.
•2結果和討論：培養48小時后計算平均菌落數，見表2
• 表2： 檢測結果
• 檢測項目 實測值 陽性對照
1： 交叉污染測試
細菌菌落總數（CFU/每次） ＜1、 ＜1 1140、900
2：產品保護測試
細菌菌落總數（CFU/每次） ＜1 1080
3：人員保護測試
撞擊式樣采樣器
細菌菌落總數（CFU/每次） 2 1680
狹縫式采樣器
細菌菌落總數（CFU/每次） ＜1 1 1680
•雖然安全柜的安全性可以通過常量氣流和過濾測試來獲取相關數據,但在實際使用中卻未必能發揮令人滿意的效果，因此，以上三個微生物測試評估顯得很重要。我們通過對安全柜進行的模擬噴菌試驗,獲取了相關信息,按美G標準NSF49-2002和歐盟標準EN12469-2000,在人員保護試驗中,撞擊式采樣器的菌落總數應≤10CFU/每次，狹縫式采樣器菌落總數應≤5CFU/每次，產品保護護試驗的標準為菌落總數≤5CFU/每次，交叉污染試驗的標準為≤2CFU/每次，本次試驗的結果表明G產生物安全柜在安全性方面已達到了G際通用要求。
