一、目的：建立無菌室中沉降菌的測試標準操作規程，保證微生物檢驗在規定潔凈級別內進行。
 
二、范圍：無菌室的沉降菌的監測。
 
三、依據：G家標準GB/T 16294-1996。
 
四、職責：微生物檢驗人員對本制度的實施負責。
 
五、內容
 1、菌落：細菌培養后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數表示。
2、測試方法：沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經48小時以上培養，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數，來評定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室的潔凈度。
3、所用的儀器和設備
1）高壓滅菌鍋鍋
2）恒溫培養箱：必須定期對培養箱進行檢定。
3）培養皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
4、培養基：普通營養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻**約45℃在無菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養數小時，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環境中存放。
5、測試步驟
1）采樣方法：將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時，再將培養皿蓋上蓋后倒置。
2）培養，時間不少于48小時。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。
3）菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。
6、注意事項
1）測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
2）采取一切措施防止人為對樣本的污染。
3）對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
4）由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
5）采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。
7、測試規則
1）測試狀態
（1）沉降菌測試前：被測試潔凈室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、必須控制在規定值內。被測試潔凈室（區）已消毒。
（2）測試狀態有靜態和動態兩種，并在報告中注明測試狀態。
（3）測試人員：測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。靜態測試時，室內測試人員不得多于2個人。
2）測試時間
（1）對單向流，如100級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。
（2）對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開始。
8沉降菌計數
1）**少采樣點數目：可按表1確定。在滿足**少測點數的同時，還宜滿足**少培養皿數，見表2。
表1 **少采樣點數目

面積(m2)	潔凈度級別
	100	10000	100000	300000
＜10	2～3	2	2	2
≥10～＜20	4	2	2	2
≥20～＜40	8	2	2	2
≥40～＜100	16	4	2	2
≥100～＜200	40	10	3	3

注：表中的面積對于單向流潔凈室是指送風面積，對于非單向流潔凈室是指房間面積。
表2 **少培養皿數

潔凈度級別	所需Φ90mm培養皿數（以沉降0.5小時計）
100	14
10000	2
100000	2
300000	2

2）采樣點的布置：工作區測試點位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應力求均勻，避免采樣點在某 局部區域過于集中，某局部區域過于稀疏。#p#分頁標題#e#
3）記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態及測試數據。
4）結果計算：用計數方法得出各個培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見下式：
平均菌落數m=（m1+m2+……+mn）/n
式中：m為平均菌落數；m1為1號培養皿菌落數；m2為2號培養皿菌落數；mn為n號培養皿菌落數；n為培養皿總數。
5）結果評定：用平均菌落數判斷潔凈室的空氣中的微生物。
6）無菌室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準（見表3）。
表3

潔凈級別	100級	10000級	100000級	300000級
標準（平均）	1個/皿	3個/皿	10個/皿	15個/皿

7）若某潔凈室（區）的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。
 
主要參考文獻：G家標準GB/T 16294-1996